免疫沉淀是利用特異性抗體識別并分離抗原的方法。

一、實驗材料：

上樣buffer的配方(用前現(xiàn)配):

2ul        1.25M Tris-HCL , pH 6.8

35ul       distilled water

2.5ul       2-mercaptoethanol

12.5ul      10%SDS

10ul       80% glycerol

2ul        bromphenol blue

TNE buffer:

10mM Tris-HCl pH 8.0

10mM NaCl

0.5mM EDTA

二、實驗方法：

1．用含有1% NP40的緩沖液重懸細胞，充分振蕩；

2．在冰上孵育30分鐘或37℃孵育10—15分鐘；

3．轉(zhuǎn)入eppendorf管中離心3分鐘；

4．將上清輕輕倒入一干凈試管，加入40—50 ul抗血清；

5．冰上孵育2小時或4℃過夜；

6．在TNE中加入100ul SPA 和100ul 5% BSA；

7．冰上孵育2小時；

8．離心使免疫復合物成球，用1ml含1%NP40,0.5% Na deoxychloate, 0.1% SDS 的TNE,在用超聲波重懸；

9．加入70ul的上樣緩沖液，振蕩；

10．熱水中水浴90秒，離心1分鐘，保留上清；

11．若不立即實驗請低溫保存。